过氧化氢酶的活性测定

过氧化氢酶的活性测定分为化学测定法和光度法两种：

一、化学测定法：高锰酸钾滴定法，碘量法。

二、光度法：紫外分光光度法，荧光分析法，化学发光法。 电化学法：极谱氧电极法，电流测定法，电泳一染色法。 放射化学测定法。 简易气量测定法。

具体测定如下：

高锰酸钾滴定法： 过氧化氢酶（CAT）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧 化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧 化氢则既是氧化剂又是还原剂。 据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。 在反应系统中加入一定量（反应过量）的H2O2溶液，经酶促反 应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的H2O2 。  即可求出消耗的H2O2的量。  酶活性用每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数 表示： 酶活(mgH2O2/gFW·min)= 式中 A—对照KMnO4滴定毫升数； B—酶反应后KMnO4滴定毫升数； VT—酶液总量（ml）； V1—反应所用酶液量（ml）; W—样品鲜重（g）； 1.7—1ml 0.1mol/L的KMnO4相当于 1.7mg H2O2。 

紫外分光光度法: H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧 化氢，使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据 测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。 以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。 过氧化氢酶活性(u/gFW/min)= 式中 A240 = AS0－ AS0—加入煮死酶液的对照管吸光值； AS1, AS2—样品管吸光值； Vt—粗酶提取液总体积（ml）； V1—测定用粗酶液体积（ml）； FW—样品鲜重（g）； 0.1—A240每下降0.1为1个酶活单位（u）； t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。 

方法比较： 研究认为，化学滴定法重复性差、紧密度 低、操作繁琐、检测线低，不适于大批量 的样品测定。其优点是不需要任何特殊的 仪器，适用性比较广泛。 紫外分光光度法具有重现性好，操作简单、 快速、检测线相对较低得到优点。但是对 于测定底物或产物改变量方面不太准确。

过氧化氢酶的活性测定总结：

综上所述，过氧化氢酶活性测定的方法大都基于 过氧化氢酶催化过氧化氢的分解反应：根据反应 生成的氧气的量、反应剩余的过氧化氢的量或根 据反应时的电子的转移及电流的变化等。同时， 影响测定结果的因素很多，如过氧化氢的浓度、 酸度、温度及重金属的含量等；并且各种方法的 准确性和灵敏度也有一定差异。因此，在测定CAT 活性时，应该根据具体组织种类及测量要求选择 适合的测定的方法。

因酶制剂产品众多，如：过氧化氢酶 粉末、α-葡萄糖苷酶、胆固醇酯酶 、尿酸酶、辅酶A、抑肽酶、胰凝乳蛋白酶、乙酰胆碱酯酶、弹性蛋白酶、胆固醇氧化酶 、超氧化物歧化酶、肠激酶、胆红素氧化酶、嘌呤核苷磷酸化酶、葡萄糖氧化酶、凝血酶、心肌黄酶、磷酸葡萄糖变位酶、己糖激酶、辣根过氧化物酶、葡萄糖 -6-磷酸脱氢酶、腺苷脱氨酶、核糖核酸酶、黄嘌呤氧化酶、溶菌酶等，详情进入酶制剂产品页