酶活单位定义：在4℃条件下反应 16小时，能够切割100 μg的GST标签的融合蛋白达90%以上所需的酶量定义为一个活性单位。

溶液成分：

Prescission Protease（储存液） 10X Cleavage Buffer

25 mM Tris-HCl，pH 8.0        500 mM Tris-HCl，pH 7.0

150 mM NaCl               1.5 M NaCl

1 mM EDTA                   10 mM EDTA

5 mM DTT                   10 mM DTT

50%（V / V）Glycerin

推荐反应体系：

反应物组成             体积

GST融合蛋白          100 μg

Prescission Protease  2μl（1 U/μl）

10X Cleavage Buffer  10 μl

ddH2O               至100 μl

参考反应时间：4℃反应 15～16 小时储存条件

柱子上切实验方法：

注意事项：蛋白必须是含有GST标签的，GST标签和目的蛋白之间有Prescission Protease酶切位点；

填料选择：GST亲和层析填料。

实验方法：

a. 大肠杆菌离心后，用binding buffer重悬，然后超声破碎，高速离心获得蛋白上清；

b. GST填料用binding buffer平衡，然后蛋白上清上样；

c. 上样结束后，用50ml的binding buffer充分洗涤，填料内保留部分binding buffer，大致略高于填料即可，然后在填料内加入100U（100μl） Prescission Protease，充分混匀；

d. 将填料柱密封，不要漏液，放置在4度内过夜切割，可以放置在微型混匀器上缓慢转动，小于60RPM（4度）；

e. 次日，将填料柱放置垂直，待填料沉淀好后，放出里面残留的液体（切割好的蛋白就在此放出液体中)；

f. 放干净后，加入Elution buffer 充分洗涤柱子，将上面的GST标签和Prescission Protease去除，然后再用binding buffer平衡柱子，在加入20%乙醇保存柱子。

SDS-PAGE电泳检测切割效果，电泳切割前和切割后蛋白，观察分子量变化，GST标签分子量大概是26KD.

保存：长期储存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。