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    T7 RNA聚合酶/T7 RNA Polymerase

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    英文名:T7 RNA Polymerase


    本酶来源于由大肠杆菌表达,表达基因为嗜菌体T7 RNA Polymerase基因,是一种高度特异识别T7启动子序列的DNA依赖的5"→3"RNA聚合酶。T7 RNA Polymerase可以催化单链或双链DNA T7启动子下游NTP的掺入,合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。

    特点:T7 RNA Polymerase可以识别修饰的NTP,例如生物素标记、地高*(代"辛")标记、荧光素标记的NTP,可以用于各种标记RNA的合成。同时对于T7启动子有高度的特异性。

    活性定义: 37℃60分钟内,催化1 nmol AMP掺入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。

    活性检测条件:40mM Tris-HCl(pH8.0),6mM MgCl2,10mM DTT,2mM spermidine,0.5mM NTP,0.6MBq/ml[3H]-ATP,20μg/ml plasmid DNA containing the specific T7 RNA Polymerase promoter sequence。

    纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶。

    酶储存溶液:50mM Tris-HCl(pH8.0),150mM NaCl,5mM DTT,0.1mg/ml BSA,0.5mM Elugent,50% glycerol。
    Transcription Buffer(5X):200mM Tris-HCl(pH7.9 at 25℃),30mM MgCl2,50mM DTT,50mM NaCl,10mM spermidine。

    失活或抑制:70℃加热10分钟可使T7 RNA Polymerase失活。加入适量EDTA也可以使T7 RNA Polymerase失活。螯合剂、浓度大于150mM的钠、钾或铵盐可以显著抑制T7 RNA Polymerase的活性。

    用途:用于RNA合成,合成的RNA可以用于或用作:杂交探针,基因组DNA序列分析,核糖核酸酶保护测定(RNase protection assay),反义RNA合成,作为体外翻译的RNA模板,RNA剪接研究的底物,RNA二级结构和RNA-蛋白质相互作用,核酸扩增分析,siRNA、miRNA等小RNA。

    保存:-20℃

     

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