荧光光度法测定影响荧光强度的外部因素

荧光光度法测定影响荧光强度的外部因素

1）温度 温度降低，荧光效率和荧光强度升高。

2）溶剂 随着溶剂的极性的增加，荧光物质的π→π* 跃迁几率增加，荧光强度将增强，荧光波长也 发生红移；溶剂粘度降低，荧光强度降低；溶 剂应达到足够的纯度。 化学工程与现代材料学院

3）pH值 ?具酸或碱性基团的荧光物质，在不同pH值时，其 结构可能发生变化，因而荧光强度将发生改变。 NH3+ OHH+ NH2 OHH+ NH- ?利用金属离子与有机试剂生成配合物进行测定金 属离子时，配合物的稳定性和组成受溶液pH值影 响较大，从而影响到它们的荧光性质。 Ga3++邻－二羟基偶氮苯 Ga3++邻－二羟基偶氮苯 化学工程与现代材料学院 pH 3~4 pH 6~7 1:1配合物(产生荧光) 1:2配合物(不产生荧光)

4)散射光 瑞利散射光(Rayleigh scattering light)：光子与物 质分子发生弹性碰撞，不发生能量交换，运动方 向改变；λ瑞利光＝λ入射光 拉曼散射光(Raman scattering light) ：光子与物 质分子发生非弹性碰撞，发生能量交换，运动方 向改变；λ拉曼光≠λ入射光 消除方法：选择适当的激发波长 化学工程与现代材料学院 448 320 a.强度 360 激发 320nm 硫酸奎宁 448 350 激发 350nm 硫酸奎宁 b.强度 320 激发 320nm 0.1mol/L硫酸 360 350 激发 350nm 0.1mol/L硫酸 400 硫酸奎宁在不同激发波长下的荧光

（a）与拉曼光谱（b） 化学工程与现代材料学院 在不同波长激发光下主要溶剂的拉曼光波长(nm) 溶剂 水 乙 醇 环己烷 CCl4 CHCl3 248 271 267 267 — — 激发光(nm) 313 365 405 350 416 469 344 409 459 344 408 458 320 375 418 346 410 461 436 511 500 499 450 502 化学工程与现代材料学院

5) 荧光熄灭 荧光熄灭（荧光猝灭）：荧光物质分子与溶剂分 子或其他溶质分子的相互作用引起荧光强度降低 的现象称为荧光熄灭。 荧光熄灭剂：能引起荧光熄灭的物质。 导致荧光熄灭的原因： ?碰撞猝灭 M+hv→M*,M*+Q → M+热 ?静态猝灭 M+Q → MQ 非荧光物质 ?转入三重态的猝灭 三重态 ?荧光物质的自猝灭 荧光物质浓度较高 ?氧的熄灭作用 化学工程与现代材料学院 荧光熄灭法: 荧光物质加入某种熄灭剂后，其荧 光强度的减少与荧光熄灭剂的浓度呈线性关系， 可用于测定熄灭剂的含量，这种方法称为荧光熄灭法。

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